細(xì)胞培養(yǎng)基的滲透壓檢測(cè)

而細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測(cè)項(xiàng)目為生物制品廠家控制原材料質(zhì)量提供一定的依據(jù)，但是隨著生物制品安全性要求的提高，其所檢內(nèi)容還有待完善，就目前的檢測(cè)方法如下：

1. 澄清度檢查法
該方法依據(jù)中國藥典2010版二部附錄IX B 澄清度檢查法制定。澄清度是檢查藥品溶液的渾濁程度，即濁度，藥品溶液中如存在細(xì)微顆粒，當(dāng)直射光通過溶液時(shí)，可產(chǎn)生光散射和光吸收的現(xiàn)象，致使溶液微顯渾濁，所以澄清度可在一定程度上反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平。水是培養(yǎng)基的溶劑，細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份只有完全溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取，細(xì)胞才能生長增殖，因此培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。通過對(duì)水溶解后的培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷細(xì)胞培養(yǎng)基的溶解性。此法是用規(guī)定級(jí)號(hào)的濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液比較，以判定細(xì)胞培養(yǎng)液的澄清度或其渾濁程度。

2. PH 值測(cè)定法
各種細(xì)胞的正常功能及一切生物化學(xué)反應(yīng)，都是在適當(dāng)和穩(wěn)定的酸堿環(huán)境下進(jìn)行的，因此細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值是細(xì)胞生長的重要參數(shù)，pH值偏低或偏高都會(huì)影響細(xì)胞生長。該法依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄Ⅵ H pH值的測(cè)定法進(jìn)行。由于各酸度計(jì)的精度與操作方法有所不同，應(yīng)嚴(yán)格按各儀器說明書與注意事項(xiàng)進(jìn)行操作，并在使用之前注意校正。
在工業(yè)化使用時(shí)，由于傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基中含有pH指示劑如酚紅等，通常依據(jù)“眼睛”觀察培養(yǎng)液顏色來判定pH，或是簡單的使用pH試紙測(cè)定，但是上述方法存在較大的主觀因素，影響正確判定，并且在配制的過程中，不同區(qū)域還可能存在一定的水質(zhì)區(qū)別等，采用pH儀器檢測(cè)可以消除人的主觀因素，準(zhǔn)確性高。此外，在檢測(cè)過程中，添加碳酸氫鈉后的培養(yǎng)基在測(cè)定的過程中，暴露在空氣中的時(shí)間也會(huì)對(duì)所測(cè)pH的準(zhǔn)確性有一定的影響。

3. 干燥減量測(cè)定方法
細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置時(shí)水份會(huì)很快升高，干燥減量表示產(chǎn)品中的含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營養(yǎng)成份有利于微生物生長，保持培養(yǎng)基中的低水份含量可以防止微生物的繁殖。檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中水份的含量采用的方法是干燥減量法。該測(cè)定方法是依據(jù)中國藥典2010年版二部附錄Ⅷ L 干燥失重測(cè)定法制定，具體是指產(chǎn)品在規(guī)定條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要是水分、結(jié)晶水及其他揮發(fā)性物質(zhì)等。由減失的重量和取樣量計(jì)算供試品的干燥失重。

4. 滲透壓
通常動(dòng)物細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，借助K＋、Na＋維持滲透平衡。雖然大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓具有有一定的耐受性，但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細(xì)胞脫水萎縮，培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細(xì)胞膨脹破裂，控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)具有重要的作用。檢測(cè)通常采用冰點(diǎn)滲透壓儀進(jìn)行，當(dāng)供試品溶液的毫滲透壓摩爾濃度太大或大于儀器的測(cè)定范圍時(shí)，用適宜的溶劑稀釋至可測(cè)定的毫滲透壓摩爾濃度范圍。

5. 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法
細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌內(nèi)毒素過高，對(duì)生物制品的質(zhì)量如純度、引起副反應(yīng)等方面有影響，而且會(huì)降低生物制品的產(chǎn)率。
細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法通常利用鱟試劑來檢測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。其檢查包括凝膠法和光度測(cè)定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測(cè)時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。通常當(dāng)測(cè)的結(jié)果有爭議時(shí)，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。

6. 微生物限度
細(xì)胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖，導(dǎo)致培養(yǎng)基變質(zhì)失效?？刂萍?xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌，是延長培養(yǎng)基有效期的方法之一，也是對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品、原料、輔料、設(shè)備器具、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)之一，對(duì)其的檢測(cè)是非常必要的。檢測(cè)方法依據(jù)中國藥典2010年版附錄Ⅺ J 微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項(xiàng)目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。

7. 細(xì)胞生長試驗(yàn)
細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制作用，因此，細(xì)胞培養(yǎng)液除滿足細(xì)胞的營養(yǎng)要求外，還必須使其生存環(huán)境接近活體的環(huán)境。其中培養(yǎng)液及外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長。細(xì)胞培養(yǎng)基的功能就是滿足細(xì)胞體外生長增殖需求，因此細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的一個(gè)直觀表述，是必檢項(xiàng)目，這也是一個(gè)產(chǎn)品性能特性表述的要求。
細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)方法是：細(xì)胞在37℃恒溫條件下，在含體積分?jǐn)?shù)為3%～10％小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中生長72h，觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；細(xì)胞生長72h后，更換不含小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。培養(yǎng)過程中加血清培養(yǎng)主要檢測(cè)培養(yǎng)基的培養(yǎng)質(zhì)量，不加血清培養(yǎng)主要檢測(cè)培養(yǎng)基的有無毒害物質(zhì)。
細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn)不但在使用一個(gè)新的產(chǎn)品時(shí)是必須進(jìn)行的檢測(cè)項(xiàng)目，在更換不同批次時(shí)，為檢測(cè)是否有批間差也必須進(jìn)行；此外，即使是同一個(gè)批次，分次購買時(shí)，或是存放擱置較長時(shí)間再次使用時(shí)，也需進(jìn)行該項(xiàng)目檢測(cè)，以防止培養(yǎng)基在貯存、運(yùn)輸過程中可能發(fā)生的質(zhì)量變化。